1.2.8. Пикриновая кислота и жидкость Буэна

Пикриновая кислота (тринитрофенол) – желтое кристаллическое вещество, слаборастворимое в воде и хорошо растворимое в органических растворителях. В сухом виде пикриновая кислота взрывоопасна. В увлажненном состоянии и в водных растворах она не способна к детонации. В лаборатории не следует хранить сухую пикриновую кислоту. Она очень часто применяется в технике фиксации, особенно в соединении с другими веществами, такими как формалин, ледяная уксусная кислота, азотная кислота, сулема, в чистом виде – сравнительно редко.

Из многочисленных смесей, содержащих пикриновую кислоту, на первом месте по комплексу показателей (качество фиксации, простота приготовления, отсутствие эффекта перефиксации) стоит жидкость Буэна, состоящая из пикриновой кислоты, формалина и ледяной уксусной кислоты. Способность тканей к окраске очень хорошо сохраняется во всех пикриновокислых смесях. При исследовании на содержание кальция нужно учитывать, что пикриновая кислота оказывает слабое декальцинирующее действие (Ромейс Б., 1954).

В фиксационной технике пикриновая кислота употребляется обычно в виде насыщенного водного раствора, к которому перед употреблением прибавляют другие жидкости. По Б. Ромейсу, для приготовления запасного раствора, который может сохраняться очень долго, всыпают 30 – 50 г пикриновой кислоты в бутылку объемом 1 – 2 л, наполняют ее подогретой дистиллированной водой, энергично взбалтывают и дают остыть. При комнатной температуре в 100 мл воды растворяется около 1,2 г кислоты, так что в остывшем растворе на дне осаждается большой избыток нерастворенных кристаллов. Если раствор использован, то к осадку снова добавляют горячую воду. Чтобы всегда был запас, лучше всего иметь две запасные емкости с пикриновой кислотой.

Отмывка пикриновой кислоты производится почти исключительно 70 – 80 %-м спиртом, но не водой, так как вызванные пикриновой кислотой осадки большей частью нерастворимы в воде. Кроме того, при помещении в воду наступает набухание соединительной ткани. При отмывке следует несколько раз сменить спирт, однако обычно нет необходимости полностью вымывать пикриновую кислоту (Ромейс Б., 1954).

Желтая окраска срезов после регидратации может быть устранена обработкой в 5 %-м водном растворе тиосульфата натрия.

Пикриновая кислота – формалин-уксусная кислота. Эта предложенная Буэном смесь принадлежит к лучшим фиксирующим жидкостям. Относительно быстро проникающий фиксатор рекомендуется как для обзорных препаратов, так и для специальных исследований. Жидкость Буэна пригодна и для фиксации эмбрионов. Окрашиваемость тканей очень хорошая. Коллагеновые волокна в ней несколько набухают; жиры и липоидные вещества сохраняются хуже. Считается, что жидкость Буэна недостаточно хорошо фиксирует ткани почки (Меркулов Г. А., 1969).

Жидкость Буэна. Фиксатор готовится ex tempore из насыщенного 1,2 %-го водного раствора пикриновой кислоты, концентрированного формальдегида (35 – 40 %) и ледяной уксусной кислоты в соотношении 15: 5: 1. Продолжительность фиксации – около 24 ч при комнатной температуре. Возможно и более длительное (до нескольких суток) пребывание срезов в жидкости Буэна без ухудшения качества последующей окраски. После фиксации полагаются короткая промывка в воде (1 – 15 мин) и более длительная (до суток) – в 70 %-м этаноле, обезвоживание и заливка в парафин. Заливка в целлоидин нежелательна. После фиксации в жидкости Буэна срезы ярко окрашиваются кислыми красителями (эозином и др.) и несколько хуже воспринимают основные анилиновые красители. В связи с этим для окончательного удаления пикриновой кислоты после депарафинирования рекомендуют обработать срезы в 0,2 %-м водном растворе карбоната лития в течение 30 с (Коржевский Д. Э. [и др.], 2010).

При заливке в целлоидин материала, фиксированного по Буэну, часто обнаруживается, что даже после длительного пребывания в растворе целлоидина препараты пропитываются не полностью и крошатся при резке. Для устранения этого недостатка рекомендуется после 96 %-го спирта переносить препараты на 10 – 48 ч в следующую масляную смесь: 10 мл кедрового масла, 80 мл абсолютного спирта, 20 мл ориганового масла, 10 мл азотной кислоты. После этого объекты снова помещают на 24 – 48 ч в 96 %-й спирт, который сменяют 2 – 3 раза. Далее проводят те же манипуляции, как при целлоидиновой заливке. После такой обработки препараты хорошо режутся и не крошатся. Предполагается, что хрупкость объектов обусловлена образованием пикрата калия, который препятствует проникновению целлоидина; масляная смесь, содержащая азотную кислоту, растворяет и удаляет его (Ромейс Б., 1954).

Данный текст является ознакомительным фрагментом.