ХРАНЕНИЕ СПЕРМЫ И ИСКУССТВЕННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕ

Хранение спермы

Сперму сохраняют в течение 24–48 часов в охлажденном буферном растворе. Если предполагается длительное хранение, ее замораживают. В большинстве случаев определение параметров спермы после хранения проводят in vitro, хотя данных об успешном оплодотворении кошек спермой, подвергавшейся длительному хранению, немного.

Охлажденная разбавленная сперма

В связи с тем, что качество спермы котов исследуют in vitro, результаты осеменения предсказать трудно. Для хранения спермы при температуре 4–5 °C применяют Test-T буфер (табл. 10.4), содержащий 20 % яичного желтка и 5 % глицерина. Хранение приводит к снижению подвижности сперматозоидов и процентного соотношения неповрежденных акросом. Повышенное содержания желтка и Сахаров снижает подвижность сперматозоидов при хранении, поэтому простой TesT-буфер, не содержащий Сахаров или желтка, вполне пригоден для разбавления спермы.

Табл. 10.4. TesT-буфер

N-трис-гидроксиметил-метил-2-аминометан-сульфоновая кислота (Tes) — 11,2 г в 150 мл дистиллированной воды;

Трисгидроксиметиламинометан (Tris) — 2,9 г в 75 мл дистиллированной воды;

Пенициллин В — 1000 МЕ/мл;

Стрептомицин — 1 мг/мл.

* Tes доводится до рН 7,4 This буфером. Желток и глицерин добавляют в случае, если раствор предполагается использовать для замораживания спермы (при охлаждении это необязательно).

Табл. 10.5. Буферный раствор, содержащий желток и лактозу

Деионизированная вода — 76 мл;

Лактоза — 11 г;

Глицерин — 4 мл;

Сульфат стрептомицина — 1000 мг/мл;

Пенициллин G — 1000 МЕ/мл;

Яичный желток — 20 мл.

Замораживание спермы

Сперму котов замораживают в желточно-лактозном буфере (табл. 10.5). Замораживание в гранулах и пайеттах дает сопоставимые результаты в отношении сохранения подвижности сперматозоидов, доли сперматозоидов с неповрежденным акросомами, проникновения через zona pellucida и связывания с оолеммой. Свежую сперму разбавляют раствором Ham's F 10 в соотношении 1:3 (с добавлением 5 % эмбриональной сыворотки телят), центрифугируют, затем смешивают с буфером. Разбавленную сперму помещают в 0,25 мл пайетты, оставляют на 10 минут при температуре 22 °C и на 60 секунд вручную опускают в пары жидкого азота, охлаждают там до -10 °C, после чего замораживают до -100 ?С, понижая температуру со скоростью -40 °C/мин, затем опускают в жидкий азот. Сперму размораживают в течение 10 секунд на воздухе, затем в течение 20 секунд на водяной бане при температуре 37 °C, после чего смешивают с раствором Ham's F 10. Кроме названного раствора, для разбавления спермы применяют буферы TesT и Трис. Подвижность сперматозоидов и количество неповрежденных акросом снижаются после размораживания.

Использование искусственного осеменения

Работы по искусственному осеменению домашней кошки проводятся преимущественно в научных целях, поскольку ее биология имеет сходство с биологией диких кошачьих, однако разработанные методы искусственного осеменения и сохранения спермы могут найти применение в племенном разведении кошек. Численность племенных животных у многих пород ограничена, в частности, из-за того, что большинство котов подвергается кастрации в связи с поведенческими проблемами (например, нанесения мочевых меток), осложняющими их содержание в домашних условиях. Недостаток производителей, а также дисбаланс численности некастрированных кошек и котов рано или поздно приводит к инбридингу и дегенерации, что оборачивается распространением врожденных дефектов и заболеваний. Замораживание спермы позволяет обеспечить не только ее экспорт в любую страну мира, но и возможность получать потомство даже от кастрированных или погибших котов. Кроме того, искусственное осеменение значительно снижает риск распространения заболеваний.