ПРИЧИНЫ БЕСПЛОДИЯ У КОБЕЛЕЙ

При исследовании причин бесплодия у кобелей клиницист может столкнуться с рядом проблем. Неадекватный или недостаточно тщательный подход приводят к необоснованному выбору гормональной терапии, что часто усугубляет ситуацию. Учитывая тот факт, что масштаб исследований определяется затратами на диагностические мероприятия и доступностью необходимого оборудования, клиницист обязан придерживаться строгой логической схемы, предусматривающей сбор анамнеза и полное обследование репродуктивного тракта.

Сбор анамнеза

Только исчерпывающие сведения о предыдущих и текущих болезнях, о состоянии репродуктивного тракта позволяют клиницисту определить серьезность проблемы. Информация должна включать в себя сведения об участии в племенной работе и общем состоянии здоровья животного. Ниже приведен приблизительный перечень вопросов.

• Сколько сук было повязано данным кобелем? Количество сук должно быть достаточно большим, иначе бесплодие суки может быть ошибочно принято за бесплодие кобеля.

• В течение какого периода времени имели место перечисленные вязки? Когда состоялась последняя успешная вязка?

• Сколько повязанных сук забеременело? Сколько щенков было в пометах? Не обнаружено ли у щенков врожденных дефектов?

• Диагностирована ли беременность у неощенившихся сук?

• Имелись ли проблемы в ходе вязки и в течение беременности у повязанных сук?

• Как определялись сроки предыдущей вязки? По поведению суки; на основании данных ветеринарного осмотра, проведенного в соответствии с клиническим протоколом; эмпирически, на основании субъективных наблюдений заводчика и/или владельца?

• Не страдают ли бесплодием суки, не забеременевшие в результате вязок? Нет ли у них заболеваний репродуктивной системы (например, кистозной гиперплазии эндометрия), вызвавших бесплодие к моменту вязки?

• Наблюдались ли изменения в половом поведении и либидо? Если да, проводилось ли лечение данной патологии с применением лекарственных препаратов?

• Какие болезни, несчастные случаи и травмы, особенно репродуктивного тракта кобель перенес? Чем он страдает в настоящее время?

Клиническое обследование

Для исключения системных заболеваний, прямо или косвенно отражающихся на репродуктивной способности, необходимо провести полный осмотр животного, уделяя особое внимание обследованию репродуктивного тракта. Некоторые из перечисленных мероприятий помогают прояснить картину при подозрении на бесплодие. Предполагаемые затраты и доступность необходимого оборудования часто определяют масштабы исследования, однако в идеале следует придерживаться рекомендуемого протокола.

Осмотр и пальпация наружных половых органов

При осмотре мошонки следует убедиться в наличии в ней семенников, выявить признаки недавних или текущих заболеваний, дерматита или адгезии с семенниками.

Тестикулы, в норме свободно перемещающиеся в полости мошонки, исследуют для определения величины, симметричности и консистенции. Они должны быть одинаковыми по размеру и соответствовать параметрам породы. Нормальные семенники должны быть упругими. Уменьшение размеров, уплотнение или, наоборот, размягчение, дряблость семенников свидетельствуют о наличии гипоплазии или дегенерации. Увеличение тестикулов либо наличие узелков указывает на воспалительный процесс или неоплазию.

Придаток семенника пальпируют в дорсолатеральной части тестикулов. Отек и узелки — признаки воспаления, гранулематоза или сегментной аплазии, однако отсутствие этих симптомов не исключает патологий эпидидимиса, зачастую протекающих без видимых изменений.

Для обследования предстательной железы указательный палец одной руки вводят ректально до обнаружения симметричной двудольной губчатой структуры, пальпируемой впереди лонных костей. Второй рукой нащупывают простату через брюшную стенку и сдвигают ее ректально, надавливая пальцами на брюшную стенку.

Пенис и препуций осматривают в последнюю очередь, непосредственно перед процедурой сбора семени, поскольку манипуляция может вызывать эрекцию. При осмотре выявляют наличие травм, инфекций, выделений, неоплазии или врожденных дефектов. Особое внимание следует уделять возможности выдвижения пениса из препуция.

Получение спермы

Получение спермы проводят в спокойной обстановке, животное помещают на устойчивую, нескользкую поверхность. Присутствие суки в состоянии охоты облегчает процедуру, но получение спермы возможно и в ее отсутствие, особенно если речь идет об опытном производителе, хотя молодые неопытные кобели или кобели со сниженным либидо могут доставлять некоторые проблемы. Впрочем, иногда и опытные самцы проявляют интерес лишь в присутствии течной суки.

Другим, хотя и менее эффективным приемом является стимуляция присутствием суки, обработанной химическим феромоном, — метиловым эфиром п-гидроксибензойной кислоты или вагинальными выделениями течной суки, которые хранились при температуре 2 °C При необходимости препарат размораживают и наносят на вульву имеющейся суки для облегчения сбора семени у кобеля.

Кобелю-донору позволяют обнюхать суку, чтобы вызвать у него половое возбуждение. Одновременно оператор производит массаж пениса через препуций, вызывая эрекцию. Перед достижением полной эрекции препуций осторожно сдвигают каудально до луковицы и стимулируют эякуляцию, слегка сдавливая пенис позади луковицы двумя пальцами. В ходе манипуляции следует избегать прикосновений к головке пениса. Эякулят собирают в подготовленную ассистентом подогретую емкость (пластиковую или стеклянную). При использовании другого метода эякулят собирают в стеклянную пробирку, помещенную в латексный конус специальной искусственной вагины, применяемой после выдвижения эрегированного пениса. Емкость для сбора спермы должна быть покрыта изолирующим материалом, сохраняющим тепло. Желательно применять минимум смазки и избегать контакта спермы с латексом.

Эякулят состоит из трех фракций. В момент отделения первой фракции, представляющей собой прозрачную жидкость, кобель, как правило, совершает активные толчкообразные движения. При задержке эякуляции самца можно простимулировать осторожным легким прикосновением сосуда для сбора эякулята к крайне чувствительной головке пениса. Вторая фракция имеет мутную консистенцию и содержит наибольшее количество сперматозоидов. После эякуляции второй фракции самец может сделать попытку развернуться, как это происходит во время нормальной вязки. После разворота пениса на 180 градусов в каудальном направлении происходит эякуляция третьей фракции, представляющей собой прозрачный секрет предстательной железы. Обычно ее собирают отдельно для посева на культуру. Начало отделения третьей фракции определяют по отдельным прозрачным каплям эякулята, выделяющимся каждые 1–2 секунды, — это явное свидетельство того, что самец эякулировал все выработанные сперматозоиды.

Оценка эякулята

Подвижность сперматозоидов. Пробирку с образцом спермы следует незамедлительно поместить в теплую воду. Каплю материала наносят на подогретое предметное стекло, покрывают другим и немедленно помещают под микроскоп со 100-кратным увеличением для определения поступательного движения сперматозоидов. Если первая и вторая фракция собраны вместе, первая фракция может отрицательно влиять на подвижность сперматозоидов, поэтому сперму разбавляют в соотношении 1:1 0,9 % цитратнымили фосфатным буферным раствором при температуре 37 °C, после разбавления отмечается улучшение подвижности сперматозоидов.

Концентрация спермы. Полное исследование предполагает подсчет общего количества сперматозоидов в эякуляте, однако то, что концентрация спермы низкая, обычно становится очевидным уже после первичного исследования. Количество спермиев может варьировать в разных образцах в зависимости от наличия простатической фракции. Многие исследователи часто ограничиваются сбором только второй фракции эякулята, прекращая процедуру перед выделением третьей фракции. По разным причинам, к которым относится и неопытность оператора, первую и вторую фракцию обычно получают вместе, поэтому концентрация спермы напрямую зависит от метода, которым ее собирают. Для оценки фертильности вычисляют общее количество сперматозоидов в эякуляте. Его легко установить, подсчитав число сперматозоидов в капле и пересчитав этот результат на общий объем эякулята. В этом случае получают объективный результат, не зависящий от метода получения спермы.

Для более точного определения на практике используют набор для разведения крови 1/100 для подсчета лейкоцитов и гемоцитометр Нейбауера. Берут 20 мкл разведенной спермы (разводят как кровь для подсчета лейкоцитов) и помещают в камеру гемоцитометра. Количество клеток в центральном квадратном миллиметре умножают на 10⁶ и на объем спермы, получают число сперматозоидов в эякуляте. Суточную продукцию спермы определяют, собирая сперму ежедневно в течение 5 дней до стабилизации количества сперматозоидов, т. е. до истощения внегонадного резерва. У здорового фертильного кобеля она составляет примерно 400 х 10⁶ сперматозоидов за 5 дней.

Морфология сперматозоидов. Для проведения исследований готовят мазок образца спермы на предметном стекле по аналогии с мазком крови. После высыхания мазок окрашивают в течение 5 минут эозин-нитрозином, анилиновым синим или кристаллическим фиолетовым и изучают под микроскопом при 1000-кратном увеличении в иммерсионной среде. Чтобы дать заключение, подтверждающее наличие или отсутствие морфологических дефектов спермы, необходимо исследовать как минимум 100 сперматозоидов.

Лейкоциты. Чтобы определить число лейкоцитов в микролитре, подсчитывают их количество в четырех угловых квадратах гемоцитометра и умножают полученную цифру на 250. При подозрении на инфекцию необходим дифференцированный подсчет лейкоцитов.

Посев спермы. Если цитология эякулята дает основания предполагать наличие инфекции, проводят бактериологическое исследование семени и секрета предстательной железы.

Объем и рН эякулята. Определяют оба показателя.

Определение щелочной фосфатазы в сперме. Щелочная фосфатаза вырабатывается в придатке семенника и присутствует в сперме здорового кобеля. Низкая концентрация или отсутствие фирмента указывает на неполную эякуляцию или двустороннюю обструкцию придатков или семяпровода.

Характеристики эякулята здоровых кобелей приведены в табл. 8.1.

Незначительные отклонения от нормы не свидетельствуют о бесплодии. Иногда результат, неудовлетворительный по одному параметру, компенсируется превосходными показателями по другому, т. е. кобель со сниженной по сравнению с нормой концентрацией спермы может использоваться в качестве производителя благодаря повышенной подвижности сперматозоидов. В случае первичного бесплодия или неясностей в диагнозе рекомендуется провести повторный анализ спермы. Повторный сбор эякулята следует производить через 2 месяца после первого исследования, поскольку за этот период происходит переход к новому циклу сперматогенеза.

Табл. 8.1. Нормальные значения параметров эякулята кобелей

Параметр — Значение

pH — 6,3–6,7;

Объем: — 1–30 мл;

1-я фракция — 1–12 мл;

2-я фракция — 1–2 мл;

3-я фракция — до 20 мл;

Сперматозоиды: подвижность — > 70 %;

С нормальной морфологией — > 80 %;

С морфологическими дефектами — <20 %;

Количество сперматозоидов — >200 х 10⁶;

Лейкоциты — < 2000/мл;

Щелочная фосфатаза (МЕ/л) — 5000–40000.

Эндокринологический анализ

В связи с тем, что секреция многих гормонов носит импульсный характер, к интерпретации единичных анализов следует подходить с осторожностью. Многие заболевания, предполагающие эндокринологическое исследование, неизлечимы, поэтому необходимо принимать во внимание затраты на его проведение. Кроме того, дополнительные расходы могут возникать в связи с обращением в неспециализированные лаборатории, проводящие исследование в порядке исключения.

Приведенный ниже протокол поможет выявить источник эндокринной дисфункции.

Выработка тестостерона. Наиболее надежный метод оценки продукции тестостерона основан на применении стимуляционного теста с использованием человеческого ХГ (44 МЕ/кг внутримышечно) или ГнРГ (2,0 мкг/кг внутримышечно). Определение концентрации тестостерона проводят перед введением и спустя 4 часа после введения человеческого ХГ или перед введением и через час после введения ГнРГ Нормой считается пост-стимуляционная концентрация тестостерона в пределах 3,7–7,5 нг/мл.

Гонадотропины в сыворотке крови. В связи с эпизодическим характером секреции гонадотропинов для определения ЛГ и ФСГ рекомендуется проводить анализ по крайней мере 3 образцов, взятых с интервалом в 20–30 минут. Нормальными показателями считают соответственно 34–85 и 73–84 нг/мл.

Интерпретация данных эндокринного анализа. Низкое содержание тестостерона и ЛГ в сыворотке указывает на дисфункцию гипоталамуса, гипофиза или семенников. Устойчиво низкие значения ЛГ после введения ГнРГ (2,0 мкг/кг внутримышечно) позволяют предположить поражение гипоталамуса или гипофиза. Однако повышение уровня ЛГ в результате стимуляции с помощью ГнРГ указывает на нормальное функционирование гипоталамуса/гипофиза, следовательно, источником проблем являются тестикулы. Низкие показатели тестостерона при повышенной концентрации ЛГ указывают на дисфункцию клеток Лейдига. Концентрация ФСГ повышается у животных с дисфункцией семенников, вероятно, из-за нарушения выработки ингибина, обусловленного поражением гонад. Это повышение коррелирует со степенью расстройства сперматогенеза.

В отсутствие других изменений низкий уровень ЛГ следует интерпретировать с осторожностью, поскольку такие показатели характерны и для здоровых животных. Кроме того, низкая концентрация ЛГ может являться следствием терапии с назначением стероидов, анестетиков и седативных препаратов.

Рентгенография

Исследование проводят при подозрении на бесплодие, вызванное заболеванием предстательной железы. Обзорная рентгенограмма каудальной части брюшной полости может выявить увеличение или другие поражения железы. Интерпретация полученных данных применительно к бесплодию зависит от анамнеза и возраста кобеля.

Ультразвуковое исследование

Широко применяется при обследовании предстательной железы и все чаще используется для оценки состояния тестикулов. Простату и тестикулы целесообразно исследовать в продольном и поперечном направлениях, используя сканер 5 МГц или лучше 7,5 МГц в режиме реального времени. Перед обследованием предстательной железы опорожняют кишечник при помощи клизмы. Кисты или абсцессы ясно визуализируются на экране. Наличие уплотненных участков указывает на развитие неоплазии или инфекцию. Ультразвуковое исследование семенников может выявить неоплазию, абсцессы или наличие полостей.

Биопсия тестикулов

Применяется для постановки диагноза ценным производителям с персистентной азооспермией или олигозооспермией. Материал получают с помощью инцизионной или пункционной биопсии. Не рекомендуется проводить биопсию здоровым животным, поскольку она может вызывать ухудшение характеристик спермы в связи с воспалительными процессами, спровоцированными процедурой.

Инцизионная биопсия. Под общей анестезией через кожу и белочную оболочку семенника, зафиксированного как для кастрации, иссекается небольшой участок ткани. Образец ткани, содержащий семенные канальцы, извлекают с помощью тонкого лезвия. Материал помещают в консервирующий раствор, например, в раствор Буина или в формалиновый, после чего передают на исследование ветеринарному патологу.

Пункционная биопсия. Перед процедурой назначают седативные препараты, затем вводят тонкую иглу диагонально в вентральную часть семенника. В принципе процедура может вызвать атрофию тестикулов, но, как правило, этого не происходит.